بهینه سازی روش استخراج آنزیم های موجود درخاک های آلوده به ترکیبات نفتی و اندازه گیری آن ها با استفاده ازدستگاه gc fid و hplc

چکیده: اخیرا روشی برای پاکسازی محیط توسعه یافته که گیاه پالایی نامیده شده است. روش به عنوان استفاده از گیاهان برای حذف و تخریب ترکیبات خطرناک از محیط تعریف می شود. در فرایند گیاه پالایی، گیاهان در مواجهه با این ترکیبات خطرناک تعدادی آنزیم به داخل خاک و یا آب ها آزاد می نمایند. مطالعات مختلف نشان داده که آنزیم های مشتق شده از گیاهان مورد استفاده در پایلوتهای حذف آلودگیهای نفتی شامل لاکازها، دهالوژنازها، نیترورداکتازها، نیتریلازها و پراکسیدازها هستند. لذا، اندازه گیری نوع و غلظت آنزیم ها در طول زمان اجرای پایلوتهای گیاه پالایی به منظور شناسایی میزان نقش آنها در حذف آلودگیهای نفتی از اهمیت ویژه ای برخوردار است. آنزیم ها، پلی پپتیدهایی هستندکه به لحاظ بالا بودن جرم مولکولی ، امکان اندازه گیری آن ها توسط gc و یا gc-ms وجود ندارد. لذا در این تحقیق برای دستیابی به روش اندازه گیری آنزیم لاکاز و پراکسیداز از دستگاه hplc استفاده شده است. هدف اصلی در این تحقیق، بهینه سازی روش اندازه گیری و استخراج آنزیم های لاکاز و پراکسیداز حاصل از گیاه پالایی خاک های آلوده به مواد نفتی، به وسیله ی hplc است. در نهایت شرایط بهینه شده با استفاده از دستگاه hplc عبارت است از : فاز متحرک بافر با ترکیب (بافر فسفات m 05/0 با 7ph: + سدیم کلراید(nacl) 3/0 مولار)، سرعت جریان فاز متحرک ml min-1 15/0 ستون cx و دتکتور uv با طول موج 220 نانومتر. از سوی دیگر، در مرحله ی بهینه سازی روش اندازه گیری جذب و استخراج آنزیم لاکاز، دستگاه اسپکتروفوتومتر مورد استفاده قرار گرفت. فعالیت آنزیم که متناسب با جذب است به وسیله ی اکسایش abts به عنوان سابستریت لاکاز اندازه گیری شد.